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Introducción
Frecuentemente, suele pensarse que la medicina tradicional abarca sólo el manejo de remedios naturales o, más específicamente, la curación herbolaria; sin embargo, constituye una concepción holística que ubica al individuo en su relación con otros hombres y con la naturaleza (México en el tiempo, 1994). En nuestro país, el 15% de la flora total posee atributos medicinales, pero conforme a distintas estimaciones, la validación química, farmacológica y biomédica de los principios activos que contienen sólo se ha realizado en un 5% de estas especies.
Las plantas presentan una amplia gama de sustancias químicas, cuyos principios activos pueden o no ser de utilidad como medicamento y encontrarse en toda su estructura o sólo en algunas secciones, además de que su concentración y calidad dependen de diversos factores como la edad del organismo, el clima, la época del año, entre otros. Una sola planta medicinal puede contener de ocho a diez principios activos (Ocegueda, et al, 2005).
Los extractos naturales son una fuente medicinal importante, como el té o los famosos remedios caseros, entre éstos las pomadas para desinflamar músculos; en fin, existe una amplia gama de posibilidades en que se tratan domésticamente los extractos naturales, buscando hacerlos accesibles para el beneficio de la salud. |
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En particular, para este caso el problema a resolver es comprobar la actividad antimicrobiana en el extracto fluido de la planta Gnaphalium spp (gordolobo), a manera de infusión, contra cepas de enterobacterias extraídas de una muestra del Lago de Guadalupe, ya que la planta es utilizada en algunas comunidades de México con fines medicinales, en comparación con algunos antibióticos conocidos por su eficacia contra estas bacterias. Por tanto, si en nuestro experimento el diámetro del halo de inhibición presenta un tamaño cercano al que registran los antibióticos del multidisco y es claramente percibido, servirá para comprobar la existencia de actividad antimicrobiana del gordolobo.
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Antecedentes
El proceso de salud-enfermedad es una realidad concreta, presente en el ciclo de vida de todo individuo y su reconocimiento trasciende la historia, por ello, sabemos que siempre ha sido una preocupación básica del ser humano observar sus padecimientos para explicarlos, dando lugar a la elaboración de complejas concepciones sobre Ia vida y Ia muerte, el origen de las enfermedades y sus tratamientos.
Parte importante deI patrimonio cultural de cada pueblo es el desarrollo de estos conocimientos y su incidencia en el desarrollo de sus integrantes, quienes los transmiten de generación en generación para preservar Ia vida al tiempo de favorecer la reproducción y florecimiento de Ia propia cultura. Miles de años de observación y experimentación empírica han sido necesarios para lograr la evolución de los diversos sistemas médicos empíricos, de sus concepciones fundamentales y la identificación del conocimiento de plantas, animales y minerales que constituyen los nichos ecológicos. Esto, a su vez, ha dado lugar a la selección de los elementos útiles por sus potencialidades curativas y a la elaboración de taxonomías que contribuyan a la identificación de los tratamientos sugeridos para las necesidades de salud de las distintas comunidades, conforme a su contexto natural y social.
Respecto de la planta objeto de nuestro interés, sabemos que el gordolobo es una herbácea, llega a medir entre 30 y 80 cm de altura, con tallo cubierto de vellosidades. Las hojas son angostas y de aspecto sedoso; sus frutos pequeños, y las semillas abundantes. En México habita en climas cálidos, semicálidos y templados; crece en terrenos abandonados y está asociado a la selva tropical caducifolia, subperennifolia, perennifolia, matorral xerófilo, bosque mesófilo de montaña, de encino y mixto de pino. Esta especie es utilizada en varias regiones del centro y norte del país, como el Distrito Federal, Morelos, Tlaxcala, Sonora y el Estado de México, donde es reconocida por su utilidad en la medicina tradicional, particularmente para tratar enfermedades respiratorias como tos, gripa, asma, bronquitis, infecciones en la garganta y problemas pectorales. Generalmente, el tratamiento consiste en el cocimiento de las ramas con flores, endulzado con miel de abeja, para tomarse caliente antes de ir a dormir. En casos de tos crónica y gripa se ingiere tres veces al día, o bien, en ayunas durante una semana. Además, suele hervirse con leche y otras plantas. Asimismo, suele utilizarse para aliviar a la persona de trastornos gástricos, úlceras y parásitos intestinales.
De acuerdo con experimentos realizados anteriormente, es posible identificar que el gordolobo tiene propiedades que contribuyen a combatir males como la tuberculosis (Hernández et al, 2004). Otro trabajo que demuestra la actividad antimicrobiana de plantas medicinales usadas en México es el del copal (Martínez et al, 2005).
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Obtención de extractos
Los compuestos químicos de las plantas se extraen por diferentes procedimientos. No obstante, para conservar las propiedades medicinales es indispensable respetar ciertas reglas de recolección, desecación, almacenamiento y presentación, ya sea a manera de infusiones, extractos o cápsulas, entre otras. Los extractos tienen la finalidad de obtener un concentrado de principios activos, pueden ser secos o líquidos; consisten en la preparación de una planta que se disuelve normalmente con agua, luego debe realizarse una evaporación del líquido excedente, o bien, efectuar extracciones repetidas del mismo líquido hasta obtener la concentración precisa. En los extractos sólidos o secos es necesaria una evaporación total del extracto o tintura.
Hay diferentes métodos para obtener un extracto, pero conforme a las exigencias de las autoridades sanitarias que autorizan su comercialización, es necesario que el método demuestre:
Eficacia estando la actividad en el extracto
Seguro, sin efectos secundarios
Calidad:
- Identificación: Huella cromatográfica
- Cuantificación en un marcador
Un agente antimicrobiano ideal muestra toxicidad selectiva, esto implica que un medicamento sea nocivo para un parásito sin serlo para el huésped y a menudo esta toxicidad es relativa más que absoluta, porque la sustancia es administrada en una concentración tolerable para el huésped buscando sólo dañar al parásito. Aún no se comprende el mecanismo de acción de la mayoría de los medicamentos antimicrobianos; sin embargo, existe cierto consenso en identificar los siguientes:
Inhibición de la síntesis de la pared celular.
Inhibición de la función de la membrana celular.
A través de la inhibición de la síntesis proteínica.
La actividad antimicrobiana se mide in vitro para determinar:
La potencia de un agente antibacteriano en solución.
Su concentración en los líquidos del cuerpo o en los tejidos.
La sensibilidad de un microorganismo dado, a concentraciones conocidas
del medicamento.
Utilizando un microorganismo estándar apropiado de prueba y una muestra conocida de medicamento para la comparación --pueden emplearse los métodos de dilución o de difusión--, es posible estimar tanto la potencia del antibiótico en la muestra, como la sensibilidad del microorganismo. Asimismo, es importante que entre los efectos de los medicamentos antimicrobianos sobre el crecimiento y la viabilidad pueda identificarse:
La sensibilidad del organismo, que puede determinarse de modo preciso por el método de dilución en tubo.
El curso de la inhibición y la presencia de lisis, que puede observarse por medidas turbidimétricas tras la adición del medicamento a un cultivo en crecimiento.
La acciónbactericida, misma que resulta evidente cuando existe una lisis importante. Sin embargo, para evidenciar y cuantificar la muerte de las células si permanecen morfológicamente intactas, es necesario practicar recuentos de las células que sobreviven (Adelberg, et al, 1987).
Medición del crecimiento
La supervivencia de cualquier grupo microbiano dentro de su nicho depende, en gran parte, de la competencia con éxito por los nutrimentos y de la conservación de una reserva de células vivientes durante la privación nutricional. En cambio, el crecimiento constituye un incremento ordenado de todos los componentes de un microorganismo, por tanto, la multiplicación celular es consecuencia del crecimiento y en microorganismos unicelulares conduce a un aumento en el número de individuos, para dar lugar a una población o cultivo.
El crecimiento bacteriano puede determinarse en función de la concentración celular (número de células por unidad del volumen de cultivo), o bien, a través de la medición del halo de inhibición de crecimiento. En este último caso, si luego de estar en contacto con la droga un microorganismo mantiene su capacidad vital, puede deducirse la inoperancia farmacológica del producto. Inversamente, si la zona que rodea al antibiótico está totalmente libre, es decir, no hay desarrollo de la bacteria, entonces, ésta es sensible a la droga. La zona circundante al antibiótico, llamada halo de inhibición, es de gran valor clínico para iniciar, continuar o modificar una terapia.
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Propósito
Ante la necesidad de explorar las propiedades curativas de diversas plantas de nuestra herbolaria nacional, al comprobar la propiedad bactericida de este extracto, se puede proponer un proyecto piloto para el aislamiento de sustancias activas del gordolobo, y producir fármacos a partir de la planta gnaphalium spp.
En caso de obtener suficiente evidencia de que el extracto de gordolobo es antimicrobiano, este estudio podrá utilizarse como antecedente a experimentos en los que se tenga la intención de proponer su aplicación en el campo de la medicina. Asimismo, constituye una oportunidad para constatar el amplio conocimiento existente en las poblaciones rurales de México acerca de las plantas medicinales, lo que llevará a acrecentar los fundamentos científicos de la práctica de la medicina tradicional.
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Fundamentación
De acuerdo con experimentos realizados anteriormente, sabemos que el gordolobo tiene propiedades contra la tuberculosis (Hernández et al, 2004).
Es un recurso natural de las regiones de Distrito Federal, Morelos, Tlaxcala, Sonora y el Estado de México, así como de los climas cálido, semicálido y templado , dadas las prácticas tradicionales de atención a la salud y el reconocimiento social de las peculiaridades del gordolobo, sus aplicaciones pueden ser potencialmente explotables en beneficio de la industria farmacéutica nacional.
El estudio constituirá una base para comprobar si el extracto fluido del gordolobo tiene actividad antimicrobiana contra las enterobacterias recolectadas de un estanque.
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Metodología
El extracto de gordolobo se obtuvo mediante una infusión con 3.6 g de la planta y 150ml de agua destilada, reduciéndose a 33 ml (22%) de la infusión, esto con base en el criterio del uso tradicional de la planta. Se sumergieron 80 círculos de papel filtro de 6 mm cada uno dentro de la infusión, esto a fin de impregnarlos del extracto de gordolobo y utilizarlos como una vía de inoculación del extracto; alrededor de éste se midieron los halos de inhibición en los cultivos de bacterias.
Las bacterias usadas en la investigación fueron obtenidas a partir de una muestra de agua del Lago de Guadalupe en un medio de precultivo líquido con la cuarta parte de la cantidad de agar bacteriológico nutritivo (según las especificaciones de la marca Bioxon), llevándola a incubación a 37ºC durante 48 hrs., con el fin de propiciar el crecimiento bacteriano. Asimismo, se prepararon 600 ml de agar bacteriológico nutritivo de la marca Bioxon. Posteriormente, sembramos 20 cajas de petri, previamente esterilizadas, con 15 ml de medio de cultivo y se inoculó con una jeringa 2 ml el medio de precultivo líquido, mezclándolas con movimientos circulares sobre la mesa de trabajo para incorporar los dos medios de cultivo, dejándolas solidificar por 5 minutos, esto con el propósito de favorecer el crecimiento bacteriano como si fuera césped.
Una vez solidificado el agar colocamos 5 círculos de papel filtro, remojados previamente con la infusión, en l6 cajas. Las 4 cajas restantes fueron usadas como grupo control colocando un multidisco en cada una de ellas, este multidisco contiene pequeñas concentraciones de antibióticos ya conocidos. Todas las cajas se colocaron en la incubadora a 37ºC durante 48 horas.
Después medimos los halos de inhibición y los comparamos con los que presentó el antibiótico con un registro de mayor actividad antimicrobiana (Pefloxacina 5 microgramos).
El porcentaje de efecto inhibitorio se calculó mediante la formula propuesta por Martinez, (1996).
La mesa de trabajo se mantuvo en condiciones de asepsia, lavanda y desinfectada con antibenzil, en un medio completamente estéril, utilizando dos mecheros Bunsen para evitar la entrada de bacterias, por medio de la convección provocada por las flamas de los mecheros. Una vez concluido el experimento se esterilizaron las cajas antes de proceder a lavarlas y evitar riesgos de propagación de bacterias.
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Resultados
Los resultados de la evaluación de la actividad antimicrobiana del extracto fluido por infusión de gordolobo aparecen en la Tabla 1. Cabe señalar que no todas las cajas presentaron actividad antimicrobiana.
En la Tabla 2 se muestra el promedio de la actividad antimicrobiana del grupo control, considerando el antibiótico que mejor efecto inhibitorio presentó.
Tabla 1
Promedio del diámetro del halo de inhibición
de cada caja Petri con extracto de gordolobo |
No de caja |
Diámetro en mm |
1 |
9 |
2 |
8 |
3 |
16.8 |
4 |
7.2 |
5 |
7.4 |
6 |
8 |
7 |
10 |
8 |
0 |
9 |
0 |
10 |
0 |
11 |
0 |
12 |
0 |
13 |
0 |
14 |
0 |
15 |
0 |
16 |
0 |
Promedio: 4.15 |
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Tabla 2
Promedio del diámetro del halo de inhibición de
cada caja petri con 5 micrográmos de Pefloxacina (PEF) |
No de caja |
Diámetro en mm |
1 |
14 |
2 |
17 |
3 |
15 |
4 |
12 |
Promedio: 14.5 |
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En la tabla 3 se comparan los promedios de los halos de inhibición, tanto del grupo control como del experimental.
Tabla 3
Promedio del diámetro del halo
de inhibición en mm |
Infusión de
Gnaphalium spp al 100%
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Control(+)
Pefloxacina 5mcg
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4.15 |
14.5 |
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Gráfica comparativa entre el diámetro de los halos del Gnaphalium (gordolobo) y la Pefloxacina
Discusión
De acuerdo con los resultados registrados en la Tabla 1, de las 16 cajas Petri cultivadas con las bacterias del Lago de Guadalupe, sólo 7 presentaron halo de inhibición, mismos que fueron muy tenues. Es posible inferir que en caso de aumentar la concentración de la infusión podrán observarse halos mejor definidos. Lo trascendente es el hecho de haber identificado la existencia de actividad antimicrobiana positiva.
De los antibióticos registrados en el multidisco, la Pefloxacina presentó una mayor actividad antimicrobiana contra las bacterias, al mostrar un halo de inhibición perfectamente delimitado y con un diámetro más grande en comparación con los otros antibióticos. De las 4 cajas Petri cultivadas con las bacterias, y utilizando como grupo control el multidisco, obtuvimos un promedio del diámetro del halo de inhibición igual a 14.5 mm (ver Tabla 2).
Al realizar una comparación entre el diámetro del halo de inhibición del extracto con el de la Pefloxacina (Tabla 3), observamos que la actividad antimicrobiana del extracto es mucho menor al de la Pefloxacina, pero aún así no puede descartarse la presencia de actividad antimicrobiana por parte del extracto de gordolobo (ver gráfica).
El porcentaje inhibitorio del extracto fue del 28% con respecto al antibiótico Pefloxacina; sin embargo, no debemos olvidar que sólo estamos evaluando la actividad antimicrobiana y no la actividad antibiótica.
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Conclusiones
- Los resultados demostraron un efecto positivo de actividad antimicrobiana, pero la concentración usada, comparándola con el grupo control, no presenta una actividad antibiótica, por tanto, puede inferirse que el mismo extracto a mayor concentración puede llegar a tener más actividad inhibitoria sobre el crecimiento bacteriano.
- El extracto de gordolobo por infusión representa una buena alternativa terapéutica contra infecciones bacterianas.
- Continuarán realizándose pruebas experimentales con el mismo extracto a mayor concentración para identificar si los halos de inhibición alcanzan mayor grado de definición sobre el cultivo de bacterias y de esta manera poder afirmar que el extracto cuenta con dicha propiedad.
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Bibliografía
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Trabajo presentado en: Encuentro de Investigación 2006,UNAM - Nivel bachillerato, donde obtuvo el Tercer Lugar en el área experimental.
